本发明涉及平消胶囊有效成分的含量测定方法,包括对照品溶液、供试品溶液的制备、高效液相色谱条件的制定,其中柚皮苷含量不低于2.13mg/粒,新橙皮苷含量不低于1.22mg/粒,该方法简单、安全可靠,能够真实反映产品的含量及质量,适合产业化的日常生产检验。
1.一种平消胶囊中有效成分的含量测定方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)对照品的制备:取柚皮苷、新橙皮苷对照品适量,制成柚皮苷对照品浓度为80ug/ml,新橙皮苷对照品浓度60ug/ml;(2)供试品的制备:取平消胶囊样品内容物用供试品加入甲醇25ml,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液5ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;(3)高效液相色谱条件:C184.6×250mm,5μm色谱柱;流动相乙腈-水=15-30∶85-70,用5-20%磷酸调节pH值为3.0;流速0.5-1.2ml·min-1检测波长245-360nm;(4)测定法:精密吸取对照品及供试品溶液注入液相色谱仪即得。
2.如权利要求1所述含量测定方法,其特征在于:步骤(3)中所述的流动相乙腈-水=20∶80,流速为1.0ml·min^-1,检测波长283nm。
3.如权利要求1所述的含量测定方法,其特征在,包括如下步骤:(1)对照品的制备:精密称取柚皮苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含柚皮苷80ug的溶液;精密称取新橙皮苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含新橙皮苷60ug的溶液;(2)供试品的制备:取平消胶囊20粒,置研钵中研细过四号筛,取0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液5ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;(3)高效液相色谱条件色谱柱:Watersxa0C18柱4.6×250mm,5μm,流动相∶乙腈-水=20∶80,用10%磷酸调节PH值3.0;检测波长为283nm;柱温:室温;流速:1.0ml·min^-1;进样方式:自动进样;(4)测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。技术领域
本发明涉及医药领域,尤其是涉及平消胶囊有效成分的含量测定方法。
背景技术
现有中成药平消胶囊,是一种常用抗肿瘤中成药。在药典及部颁标准记载的平消胶囊的【含量测定】取本品30粒,倒出内容物,精密称定,研细,取粉末约4g,精密称定,置100ml具塞锥形瓶中,精密加入氯仿20ml与浓氨溶液1ml,密塞,称定重量,冷浸48小时,或超声提取40分钟,称重,用氯仿补足损失的重量,充分振摇,滤过,精密量取滤液10ml,置分液漏斗中,以硫酸溶液(0.5mol/L)提取4次,每次10ml,提取液均以硫酸溶液(0.5mol/L)预先湿润的滤纸滤入50ml量瓶中,并以硫酸溶液(0.5mol/L)适量洗涤滤器,洗液并入量瓶中,再加硫酸溶液(0.5mol/L)至刻度,摇匀,精密量取10ml,置50ml量瓶中,加硫酸液(0.5mol/L)至刻度,摇匀照分光光度法,在262nm及300nm波长处测定吸收度,平均粒重本品每粒含马钱子以士的宁(C12H22N2O2)计,应为0.25~0.35mg。平消胶囊处方为郁金54g仙鹤草54g五灵脂45g白矾54g硝石54g干漆(制)18g枳壳(麸炒)90g马钱子粉36g,枳壳的含量最多,是最主要的组分,上述药典中含量测定方法只测定马钱子中士的宁的含量,不能真实反映产品的质量,以至于产品的稳定性无法控制,给生产及患者带来隐患。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明提供了一种平消胶囊有效成分的含量测定方法,该方法准确、可靠、能够真实反映产品的质量。本发明是通过以下技术方案实现的:一种平消胶囊中有效成分的含量测定方法,包括如下步骤:(1)对照品的制备:取柚皮苷、新橙皮苷对照品适量;(2)供试品的制备:取平消胶囊内容物用甲醇或乙醇提取后至于容量瓶中备用;(3)高效液相色谱条件:C₁₈xa04.6×250mm,5μm色谱柱、流动相乙腈-水、流速0.5-1.2ml·min^-1检测波长245-360nm;(4)测定法:精密吸取对照品及供试品溶液注入液相色谱仪即得。上述步骤(1)所述柚皮苷对照品浓度为80ug/1ml,新橙皮苷对照品浓度60ug/1ml。上述步骤(2)中所述的供试品用甲醇超声提取后至于容量瓶中备用。优选步骤(2)中所述的供试品加入甲醇25ml,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液5ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。上述步骤(3)中流动相的pH值为2.0-5.0,流动相乙腈-水15-30∶85-70.所述流动相用酸调节pH值,优选为pH值3.0,流动相乙腈-水=20∶80;所述的酸包括但不限于为磷酸、醋酸、甲酸、柠檬酸、酒石酸、硫酸氢纳、硫酸氢钾、盐酸、硫酸、碳酸、高氯酸、苹果酸、枸椽酸、水杨酸、咖啡酸等,优选磷酸、醋酸、甲酸、柠檬酸、酒石酸、硫酸氢纳、硫酸氢钾等,最佳为磷酸。所述磷酸浓度为5-20%,优选浓度为10%。本发明中优选10%磷酸能够使平消胶囊中各色谱峰有很好的分离,改善峰拖尾现象。上述步骤(3)中所述的优选流动相乙腈-水=20∶80,流速为1.0ml·min^-1,检测波长283nm上述步骤(4)中所述测定,优选柚皮苷含量不低于2.26mg/粒,新橙皮苷含量不低于1.33mg/粒。本发明最佳的平消胶囊有效成分含量测定方法,包括如下步骤:(1)对照品的制备:精密称取柚皮苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含柚皮苷80ug的溶液;精密称取新橙皮苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含新橙皮苷60ug的溶液;(2)取胶囊20粒,置研钵中研细过四号筛,取约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液5ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;(3)高效液相色谱条件色谱柱:WatersC₁₈柱4.6×250mm,5μm,流动相:乙腈-水=20∶80,用10%磷酸调节PH值3.0;检测波长为283nm;柱温:室温;流速:1.0ml·min^-1;进样方式:自动进样;(4)测定法xa0分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。本发明所述的平消胶囊的处方为:重量份药材郁金1-5份、仙鹤草1-5份、五灵脂1-5份、白矾1-5、硝石1-5、制干漆0.5-3份、麸炒枳壳3-7份、马钱子粉0.5-4份。优选重量份药材郁金2-4份、仙鹤草2-4份、五灵脂2-4份、白矾2-4、硝石2-4份、制干漆0.5-2份、麸炒枳壳4-6份、马钱子粉1-3份。最佳重量份药材郁金3份、仙鹤草3份、五灵脂2.5份、白矾3份、硝石3份、制干漆1份、麸炒枳壳5份、马钱子粉2份。本发明平消胶囊的制备方法按照药典制备,优选下述方法制备:以上8味药材,取干漆、五灵脂、白矾、硝石粉碎成细粉,取郁金、麸炒枳壳粉碎,用乙醇为溶剂进行渗漉,收集渗漉液;渗漉后的药渣与仙鹤草加水煎煮二次,滤过,合并煎液;渗漉液回收乙醇后,与上述滤液合并,减压浓缩成稠膏,干燥,粉碎成细粉,加入马钱子粉、上述细粉及辅料适量,混匀,制粒,干燥,装入胶囊,即得。最佳地,本发明所述的制备方法,包括如下步骤:以上八味,干漆、五灵脂、白矾、硝石粉碎成细粉;郁金、麸炒枳壳粉碎成最粗粉,用70%乙醇为溶剂,进行渗漉,收集渗漉液;药渣与仙鹤草加水煎煮二次,滤过,合并煎液;渗漉液回收乙醇后,与上述滤液合并,减压浓缩成稠膏,干燥,粉碎成细粉,加入马钱子粉、上述细粉及辅料适量,混匀,制粒,干燥,装入胶囊,即得。为了更好的证明本发明的含量测定的安全可靠,本发明通过下述方法学加以验证。试验例xa0xa0方法学验证1仪器与试药试剂:乙腈(色谱纯),甲醇、磷酸均为分析醇。样品:西安正大制药有限公司提供。对照品:柚皮苷对照品(批号:110722-200309)、新橙皮苷对照品(批号:111857-201001)均由中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用。仪器:高效液相色谱仪(Agilent1200);;DELTAxa0320xa0PH计(梅特勒-托利多仪器有限公司);AL-204型电子分析天平(Max=210g、d=0.0001g、梅特勒-托利多仪器有限公司);TG332A型微量分析天平(Max=20g、d=0.01mg);HQ-500DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。2、色谱条件:见实施例一3、对照品溶液制备:见实施例一4、供试品溶液制备:见实施例一5、缺枳壳的阴性供试品溶液的制备按处方组成十分之一份量,取除去枳壳的其余药味一起,按工艺要求制得不含枳壳的阴性样品,取该阴性样品,按供试品溶液的制备方法制备缺枳壳的阴性供试品溶液。6、测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。7、缺枳壳的阴性样品干扰性测定:分别精密吸取上述对照品溶液,供试品溶液及缺枳壳的阴性供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,供试品溶液在与对照品溶液保留时间相同处有相应的色谱峰,缺枳壳的阴性供试品溶液在与对照品溶液保留时间相同处没有相应的色谱峰,但与供试品溶液其它色谱峰保留时间一致,色谱峰信息丰富,阴性样品无干扰。8、线性关系的考察分别精密吸取柚皮苷对照品溶液(浓度分别为,每1ml含柚皮苷8.48ug、25.44ug、42.4ug、59.36ug、84.8ug)各10ul,新橙皮苷对照品溶液(浓度分别为,每1ml含新橙皮苷7.95ug、23.85ug、39.75ug、55.65ug、79.5ug)各10ul,分别注入液相色谱仪,测定。以对照品浓度为横坐标(X),以峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归,得柚皮苷与新橙皮苷线性回归方程。柚皮苷线性范围在8.48~84.8μg范围内呈良好的线性关系。线性回归方程为Y=15.819X-3.3008;R2=0.9999。结果分别见表1和图1。新橙皮苷线性范围在7.95~79.5μg范围内呈良好的线性关系。线性回归方程为Y=17.518X-1.9234;R2=1。结果分别见表2和图2。表1xa0柚皮苷线性关系考察结果xa0xa0序号
xa0xa0柚皮苷浓度
xa0xa0峰面积
xa0xa01


xa0xa08.48μg

xa0xa0133.2
xa0xa02


xa0xa025.44μg

xa0xa0397.1
xa0xa03


xa0xa042.40μg

xa0xa0671.4
xa0xa04


xa0xa059.36μg

xa0xa0926.8
xa0xa05


xa0xa084.80μg

xa0xa01342.8
表2xa0新橙皮苷线性关系考察结果xa0xa0序号
xa0xa0新橙皮苷浓度
xa0xa0峰面积
xa0xa01


xa0xa07.95μg

xa0xa0138
xa0xa02


xa0xa023.85μg

xa0xa0418.2
xa0xa03


xa0xa039.75μg

xa0xa0690.8
xa0xa04


xa0xa055.65μg

xa0xa0971.65
xa0xa05


xa0xa079.50μg

xa0xa01392.75
9、精密度试验取平消胶囊供试品溶液,按上述色谱条件,分别重复进样6次,计算结果,分别见表3表3xa0平消胶囊精密度结果ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>由以上结果可知,本仪器精密度良好。10、稳定性试验在室温条件下,平消胶囊供试品溶液(110118k批),按′′供试品溶液′′方法制备供试品,分别于制备后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h时间间隔,分别测定样品中柚皮苷、新橙皮苷含量,并计算其RSD值。结果见表4。表4xa0平消胶囊稳定性试验ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>结果表明,供试品溶液在室温下,24小时内稳定性良好。11、重现性试验分别取同一批号的平消胶囊(110118k批)六份,按供试品溶液的制备方法,制备供试品溶液6份,按上述色谱条件,分别测定,计算其含量。结果见表5。表5xa0平消胶囊重现性试验ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>结果表明该方法重现性良好。12回收率试验分别精密称取已知含量的平消胶囊(110118k批)样品6份,按照《中国药典》2010年版一部附录Xxa0VIIIxa0A中药质量标准分析方法验证指导原则,精密称定柚皮苷对照品、新橙皮苷对照品适量,置200ml容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度。分别精密吸取一定浓度的柚皮苷对照品溶液(0.2727mg/ml)10ml,加入精密称定的样品中,从′′置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇10ml′′起,至′′精密量取续滤液5ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。′′制备供试品溶液。再精密吸取一定浓度的新橙皮苷对照品溶液(0.1568mg/ml)10ml加入精密称定的样品中,从′′置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇10ml′′起,至′′精密量取续滤液5ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。′′制备供试品溶液。按正文拟订的方法测定含量,以下列公式计算回收率,结果分别见表6、表7。计算公式:ntent="drawing" img-format="tif" inline="yes" orientation="portrait" wi="700"/>对照品加入量(mg)表6xa0平消胶囊柚皮苷加样回收率结果ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>表7xa0平消胶囊新橙皮苷加样回收率结果ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>从上述表6、7回收率可见,本方法安全可靠,能够真实反映产品含量。13xa0十批样品含量测定结果取十个批号的平消胶囊样品,按照正文拟订的含量测定方法分别制备供试品溶液,按上述色谱条件进行分析,结果见表8。表8xa0十批平消胶囊含量测定结果xa0xa0批号
xa0xa0柚皮苷含量(mg/粒)
xa0xa0新橙皮苷含量(mg/粒)
xa0xa01011129
xa0xa02.92
xa0xa01.71
xa0xa01011131
xa0xa03.27
xa0xa01.92
xa0xa01011133
xa0xa03.26
xa0xa01.91
xa0xa01012135
xa0xa03.19
xa0xa01.88
xa0xa01012137
xa0xa02.99
xa0xa01.76
xa0xa01012140
xa0xa02.99
xa0xa01.76
xa0xa01101155k
xa0xa03.14
xa0xa01.76
xa0xa01101160k
xa0xa02.95
xa0xa01.67
xa0xa01101161k
xa0xa02.72
xa0xa01.47
xa0xa01101162k
xa0xa02.97
xa0xa01.57
xa0xa0平均含量
xa0xa03.04
xa0xa01.74
根据10批平消胶囊含量测定结果及转移率影响因素,限度定为:柚皮苷:3.04mg/粒×70%=2.13mg/粒,新橙皮苷:1.74mg/粒×70%=1.22mg/粒综上所述,本发明的平消胶囊的含量测定方法简单,可靠,操作性强,适日常的生产检验。本发明的色谱峰分离度高。分离完全,峰行好,无拖尾峰及前沿峰,每个色谱峰里不掺杂杂质峰。
附图说明
图1柚皮苷线性关系图图2新橙皮苷线性关系图
具体实施方式
通过下面具体实施方式解释本发明的内容,并不是对本发明保护范围的进一步限定。实施例1取重量份药材郁金54克、仙鹤草54克、五灵脂45克、白矾54克、硝石54克、制干漆18克、麸炒枳壳90克、马钱子粉36克;以上八味,干漆、五灵脂、白矾、硝石粉碎成细粉;郁金、麸炒枳壳粉碎成最粗粉,用70%乙醇为溶剂,进行渗漉,收集渗漉液600ml,回收乙醇,备用;药渣与仙鹤草加水煎煮二次,滤过,合并滤液并与上述渗漉液合并,减压浓缩成稠膏,干燥,加入马钱子粉、上述细粉及淀粉适量,混匀,制粒,干燥,装入胶囊,制成1000粒,即得。含量测定方法(1)对照品的制备:精密称取柚皮苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含柚皮苷80ug的溶液;精密称取新橙皮苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含新橙皮苷60ug的溶液(2)取本品20粒,置研钵中研细过四号筛,取约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液5ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。(3)高效液相色谱条件色谱柱:WatersC₁₈柱4.6×250mm,5μm,流动相:乙腈-水=20∶80,用10%磷酸调节pH值3.0;检测波长为283nm;柱温:室温;流速:1.0ml·min^-1;进样方式:自动进样。(4)测定法xa0分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,柚皮苷含量3.04mg/粒,新橙皮苷含量1.74mg/粒。实施例2对照品溶液按照实施例1制备供试品溶液:取实施例1的平消胶囊20粒,置研钵中研细过四号筛,取约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入乙醇25ml回流提取处理30分钟,放冷,滤过,减压浓缩干燥,再用25ml甲醇溶解后定容到25ml容量瓶中,精密量取续滤液5ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。色谱条件:WatersC₁₈柱4.6×250mm,5μm,流动相:乙腈-水=15∶85,用20%磷酸调节pH值2.0;检测波长为283nm;柱温:室温;流速:1.2ml·min^-1;进样方式:自动进样。测定法xa0xa0分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,柚皮苷含量2.99mg/粒,新橙皮苷含量1.67mg/粒。实施例3对照品溶液按照实施例1制备供试品溶液:取实施例1的平消胶囊20粒,置研钵中研细过四号筛,取约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,称定重量,超声处理40分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液5ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。色谱条件:WatersC₁₈柱4.6×250mm,5μm,流动相:乙腈-水=30∶70,用5%磷酸调节PH值5.0;检测波长为283nm;柱温:室温;流速:0.5ml·min^-1;进样方式:自动进样。测定法xa0xa0分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,柚皮苷含量2.99mg/粒,新橙皮苷含量1.76mg/粒。